HA Tag CUTANA™ CUT&RUN Antibody

產(chǎn)品概述

類型：多克隆

主機(jī)：兔

目標(biāo)大小：不適用

格式：親和純化 IgG

反應(yīng)：HA表位（YPYDVPDYA）

應(yīng)用：切割和運(yùn)行，WB

HA 抗體 （0.5 μg） 和 500，000 個(gè) MDA-MB-231 細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá) c 端 3xHA 標(biāo)記的 GATA3 [1]*.使用MACS2調(diào)用峰值。（一）顯示GATA3-3xHA峰的熱圖 相對于 IgG 和 H3K4me3 對照抗體（分別為 EpiCypher 13-0042 和13-0041），按強(qiáng)度排列（頂部至 底部）并著色，紅色表示高度本地化 富集和藍(lán)色表示背景信號。（二）GATA3-3xHA峰值的數(shù)量 屬于功能注釋基因組的不同類別 繪制區(qū)域。

A）荷馬分析中的分析確定 GATA3 共識主題，表示為序列徽標(biāo) 位置權(quán)重矩陣，在GATA3-3xHA下富集 切割和運(yùn)行峰值。（二）GATA3-3xHA的數(shù)量 含有來自圖A的GATA3共識基序的峰是 由維恩圖表示。（中四）二 代表性位點(diǎn)顯示GATA3-3xHA峰與 下面提到的共識主題（IGV）。

（A）一組重組核小體 創(chuàng)建其中各種表位標(biāo)簽（3xTY1，3xFLAG，3xHA） 融合到組蛋白H3尾部。融合的核小體和 將未修飾的對照固定在鏈霉親和素珠上 （SA Bead）并與ConA一起加標(biāo)到CUT&RUN樣品中 磁珠固定3xHA MDA-MB-231細(xì)胞（圖1）。高可用性標(biāo)簽 然后加入抗體和pAG-MNase（EpiCypher15-1016）以釋放抗體結(jié)合的核小體 通過pAG-MNase介導(dǎo)的裂解進(jìn)入溶液 接頭DNA（淺藍(lán)色）。這種方法提供了一個(gè)定義的 實(shí)驗(yàn)對照以評估HA Tag抗體是否 選擇性切割具有高特異性的靶表位 和最小的背景。（二）CUT&RUN序列讀數(shù)與獨(dú)te的DNA比對 “條形碼"對應(yīng)于刺入中的每個(gè)核小體 面板。數(shù)據(jù)表示為恢復(fù)的讀取百分比 相對于預(yù)期目標(biāo)（3xHA，設(shè)置為 100%）。這 分析證實(shí)HA標(biāo)簽抗體特異性 將靶表位標(biāo)記的核小體釋放到 溶液。

多標(biāo)簽融合蛋白的大腸桿菌細(xì)胞蛋白 用于制備全細(xì)胞裂解物。指示的 將一定量（ng）的裂解物上樣到4-20%SDS-PAGE凝膠上 并在標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)印跡條件下使用 HA 進(jìn)行分析 標(biāo)記抗體 （1：25，000）。

免疫原

合成的HA肽（序列：YPYDVPDYA）。

配方

磷酸鹽中的抗原親和純化抗體 （1.0 mg/mL） 緩沖鹽水（PBS），0.09%sodium azide。

儲存和穩(wěn)定性

自收到之日起在 4°C 下穩(wěn)定保存 1 年。

推薦稀釋度：

切割和運(yùn)行：0.5 微克

蛋白質(zhì)印跡 （WB）：1：1，000 - 1：30，000

背景參考文獻(xiàn)：

[1] Takakuet al.基因組生物學(xué).（2016）. PMID：26922637

*感謝 Takaku 博士 （UND） 的 3xFlag-GATA3-3xHA MDA-MB-231 細(xì)胞。

產(chǎn)品詳情

名稱      HA Tag CUTANA™ CUT&RUN Antibody

編號      13-2010

品牌      epicypher