swant 6B3說(shuō)明書(shū)
產(chǎn)品名稱(chēng)： 鈣網(wǎng)膜蛋白小鼠單抗
英文名稱(chēng) ： Mouse anti-calretinin (monoclonal)
貨號(hào) ： 6B3
批號(hào)： 010399
外觀： 凍干粉
溶解：每管用200 µl雙蒸水
規(guī)格：200UL
6B3鈣網(wǎng)膜蛋白抗體是用重組人calretinin-22k[1]免疫小鼠制備的單克隆抗體。calretinin 22k是calretinin基因的另一個(gè)剪接產(chǎn)物，與calretinin在Arg178之前*相同。融合后，以重組人視網(wǎng)膜蛋白為靶點(diǎn)篩選雜交瘤細(xì)胞，篩選出克隆6B3。6B3抗體識(shí)別前4個(gè)EF-手性結(jié)構(gòu)域內(nèi)的一個(gè)表位，該結(jié)構(gòu)域與calretinin及calretinin-22k[1]識(shí)別位點(diǎn)相同。該蛋白與鈣結(jié)合蛋白D-28k和鈣調(diào)素[2]都屬于EF-手性家族的鈣結(jié)合蛋白。6B3抗體與人和大鼠組織中的鈣網(wǎng)膜發(fā)生特異性反應(yīng)，與鈣結(jié)合蛋白D-28k或其他已知的鈣結(jié)合蛋白不產(chǎn)生交叉反應(yīng)。此特異性取決于改抗原在腦組織中的分布位置。
6B3抗體也可識(shí)別人間皮瘤[3，4]中的鈣網(wǎng)膜蛋白。
1、生物素-親和素標(biāo)記免疫組化檢測(cè)4%多聚甲醛（或10%福爾馬林緩沖液）固定的腦組織冷凍/石蠟切片；
2、免疫酶標(biāo)記/免疫印跡驗(yàn)證；
3、免疫組織化學(xué)方法對(duì)Calretinin敲除小鼠的組織進(jìn)行鑒定。
WB： 免疫印跡； IHC ：免疫組織化學(xué)； ELISA：酶聯(lián)免疫。
免疫印跡（WB）： 1：1'000 - 1：2'000。
抗體稀釋比例是基于生物素標(biāo)記法的免疫組化及免疫印跡檢測(cè)方法，其宜的抗體濃度需根據(jù)客戶(hù)具體實(shí)驗(yàn)，經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索確定。
解凍后分裝（如每管1ul或5ul等）保存于- 80°C冰箱。短期保存-20°C。近期頻繁使用保存于 4°C (增加0.01% 疊氮鈉)。避免反復(fù)凍融。建議分裝小份儲(chǔ)存。
鈣網(wǎng)膜蛋白6B3抗體在腦組織抽提液中的特異表達(dá)：(圖 1)
1 2 3 4 5 6 7
29 KDa |
圖. 1不同種屬腦組織勻漿液的WB檢測(cè)結(jié)果。上樣順序依次為：1 小鼠；2 大鼠；3 豚鼠；4 兔子；5 食蟹猴；6 斑馬魚(yú)；7雞。WB結(jié)果表明，在所有物種中都能檢測(cè)到29kDa的條帶。 |
鈣網(wǎng)膜蛋白6B3高表達(dá)于正常小鼠腦組織（圖2a），calretinin基因敲除小鼠腦組織相同區(qū)域未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)（圖2b）。
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圖2a: 正常小鼠腦組織McAB 鈣網(wǎng)膜蛋白6B3免疫組化結(jié)果顯示：大腦皮層神經(jīng)元染色陽(yáng)性（箭頭已標(biāo)識(shí)）。100 X鏡下 | 圖2b：calretini基因敲除小鼠大腦McAB鈣網(wǎng)膜 6B3免疫組化染色結(jié)果顯示：未見(jiàn)大腦皮層神經(jīng)元陽(yáng)性染色[5]二抗產(chǎn)生的非特異性染色見(jiàn)血管處（*號(hào)標(biāo)出）100 X鏡下。 |
